4 測試方法
4.1 方法提要
本方法采用計數(shù)濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基，經(jīng)若干時間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù)，以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
4.2 所用的儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基
a）浮游菌采樣器；
b）真空抽氣泵；
c）培養(yǎng)皿；
d）培養(yǎng)基；
e）恒溫培養(yǎng)箱。
4.3 浮游菌采樣器
浮游菌采樣器宜采用撞擊法機理的采樣器，一般采用狹縫式采樣器或離心式采樣器。
4.3.1 采用的浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。
4.3.2 狹縫式采樣器的原理
狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣，通過采樣器的縫隙式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉(zhuǎn)的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計數(shù)。
4.3.3 離心式采樣器的原理
離心式采樣器由于內(nèi)部風機的高速旋轉(zhuǎn)，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養(yǎng)條上，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計數(shù)。
4.3.4 狹縫式采樣器的使用要點
應(yīng)嚴格按儀器說明書的要求進行操作。
4.3.4.1 校驗
采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性。校驗的項目有：定時器、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速、流量計。
4.3.2 每次測試前應(yīng)按說明書上的規(guī)定，先接通電源，啟動真空抽氣泵，然后調(diào)節(jié)流量計及定時器。
4.3.4.3 空氣采樣量根據(jù)需要選定。已知采樣器的流量（L/min），設(shè)定采樣時間（min），兩者相乘即采樣量（L）。
4.3.4.4 注意事項
4.3.4.4.1 采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造。
4.3.4.4.2 采樣管嚴禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。
4.3.4.4.3 采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測點的高度定，盡量減少彎曲。
4.4 真空抽氣泵
4.4.1 真空抽氣泵的排氣量應(yīng)與采樣器匹配。
4.4.2 宜采用無油真空抽氣泵，必要時可在非氣口安裝氣體過濾器。
4.4.3 真空抽氣泵安裝的位置必須適當，一般裝在采樣器下面。
4.5 培養(yǎng)皿
4.5.1 狹縫式采樣器一般采用? 150mm×15mm、? 90mm×15mm、?65mm×15mm三種規(guī)格的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿?？筛鶕?jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。
4.5.2 離心式采樣器采用專用的固形培養(yǎng)條。
4.6 培養(yǎng)基
普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認可的培養(yǎng)基。其配制方法見附錄A（標準的附錄）。
4.7 恒溫培養(yǎng)箱
必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。
4.8 測試步驟
4.8.1 測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。
4.8.1.1 采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜一直放在被測房間內(nèi)。
4.8.1.2 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。
4.8.1.3 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。
4.8.1.4 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內(nèi)壁進行消毒時，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。
4.8.1.5 采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。
4.8.2 狹縫式采樣器的采樣程序
4.8.2.1 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。
4.8.2.2 關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。
4.8.2.3 置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動定時器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。
4.8.3 培養(yǎng)
4.8.3.1 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.8.3.2 在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。
4.8.3.3 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
4.8.4 菌落計數(shù)
4.8.4.1 用肉眼直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。
4.8.4.2 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。
4.8.5 注意事項
4.8.5.1 使用前仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。
4.8.5.2 采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。
4.8.5.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。
4.8.5.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。
